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基因组DNA提取流程

基因组DNA的提取(以冻存的抗凝血为例):

1500ul抗凝全血,室温下解冻后加入500ulPBS磷酸盐缓冲液,充分混匀后12000rpm离心5分钟,弃上清;加400μlSTE10%SDS 40μl,蛋白酶-K 5μl20mg/ml
  
 237消化过夜(或55 3小时)
  
 3.等体积饱和酚,轻轻摇匀1分钟左右。12000rpm 5分钟,离心,吸上层入另一1.5ml离心管;
   
4.上清液加等体积的酚:氯仿:异戊醇(25241),倒转混匀1分钟左右。12000rpm 5分钟,离心,吸上层入另一1.5ml离心管;
   
5.上清液加等体积氯仿:异戊醇(241),倒转混匀10分钟,12000rpm 5分钟,取上清入另一管;
   
6.加1/10体积3M 醋酸钠,混匀后再加3倍体积的4冰箱冷却后的无水乙醇,轻柔振摇;看到一点点白色絮状物。

7-20放置20~30分钟,12000rpm 低温(4)离心10分钟,沉淀DNA,去上清(可以直接倒掉);
    8
.加1ml 70%乙醇洗涤,12000rpm 离心10分钟,去上清;
   
9.自然干燥后,用0.5*TE溶解,测A260/A280值。


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